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酶联免疫试剂盒操作的通用的规则
发布时间:2019-01-11   点击次数:234次

酶联免疫试剂盒是较普遍常用的药物残留检测方法,与仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等特点,但对实验操作条件的要求比较严格。实验条件主要由实验室的操作环境和操作人员的操作熟练程度两方面组成,但ELISA试剂盒对实验室操作环境的要求是几种药物残留检测方法中相对较低的。由于大部分的试验操作步骤都是由实验人员来完成的,人为的误差相对严重一些。本人结合几年的工作实践介绍一下进行ELISA操作的时候应该注意的问题。

 酶联免疫试剂盒操作的通用的规则
1 .要确保微量加样器的准确性,可以使用蒸馏水和电子天平进行确定(由于蒸馏水不含杂质,温度环境为20%左右时,lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加样器都应该将其高量程和zui低量程进行确定。
2. 在使用微量加样器时,吸取不同瓶子中液体后要更换枪头,即使吸取标准品溶液。
3. 吸取液体时速度不易太快,以免产生气泡,吸取的量不够准确。
4. 将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孑L壁接触,液滴会自然流下去。吸入液体时的zui好的方法是吸两档打一档,防止由于枪头的毛细作用使得部分液体不能流出而造成的误差。
5. 吸取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸,减少误差。
6 .液体全部加入酶标孔后,zui好将酶标板放在桌子上平行轻轻摇晃30s,使液体充分混合均匀,也使其得到充分的反应。
7. 孵育时要使盖板膜封好酶标板,防止水分蒸发,以防曲线不成线性。
8 .实验前30min将试剂盒中的所有试剂从冰箱取出,使试剂盒中的所有试剂与提取好的样品溶液的温度相同,酶标板只要取出所需量。
9. 由于底物显色剂对光及其敏感,因此要避光保存。
10 .手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15~30s,不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中,防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。
11 .检测吸光度前应将酶标仪打开,将其预热30min以上。
12. 底物为TMB,避免与皮肤相接触。终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性,应尽量避免接触皮肤
13 .孵育的时间应该严格按照试剂盒说明书上的时间为准。
14 .要尽量做双孔实验,这样才既能保证数据的准确性,又能反映出试剂盒的精密度。
15. 对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行验证。
16 .没有去离子水或双蒸水时,可以使用娃哈哈纯净水配制溶液,切勿使用自来水。

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