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ELISA试剂盒灵敏度低原因解析
发布时间:2019-07-01   点击次数:107次

上月中旬,贵州大学王老师在我司订购了小鼠免疫球M(IgM)elisa试剂盒。实验结束后,反映阳性对照、质控在内的所有板孔颜色均较淡。这是什么原因造成的?我司技术分析如下:

1. 试剂盒必须在有效期内使用, 超过有效期的产品可能会产生很弱的信号;

2. 试剂盒没有按规定进行保存,受高温影响;

3. 试剂、样品用前未平衡至室温;

4. 加入试剂的体积和时间有误, 移液器计量不准,吸嘴内水分太多或不清洁;

5. 洗板及加样过程中,酶标受污染失活而失去催化显色剂显色的能力;

6. 孵育时间及孵育温度未达到要求 ,反应板放入培养箱时注意温度并及时调整;

7. 洗板次数过多,或浓缩洗液稀释倍数不符合要求;洗涤冲击力太大。浸泡时间太长;

8. 显色剂加量不足或顺序颠倒,或混合后加入;

9. 底物作用时间不够;

10. 蒸馏水水质有问题;

 

实验前检查试剂的组分及批号,确认试剂未过期。不要将试剂盒长时间置于常温下,按使用规定储藏。

确定所使用的试剂体积正确,加入时间适当。校正移液器,移液器与吸嘴配合要紧密吻合。移液不宜太快,排放应完全。

确认盛酶标的容器不含酶抑制剂如叠氮钠等,确认配制洗液的容器已洗干净,确认配制洗液的纯化水达到要求且未受污染。

孵育温度应控制在37-38℃,孵育时间严格按照说明书操作。保温期内不宜多开门,以免影响保温。

严格按说明书要求稀释浓缩洗液及洗板,减小洗涤冲击力,按说明书要求置留洗涤液时间和洗涤次数。

显色剂滴瓶垂直向下,持力均匀,滴速不宜过快,先加显色剂 A,后加显色剂B,不可将A、B液混合后加入准确定时间。

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